实验目的:本次实验用高压均质机对293F细胞进行破碎处理,使其分泌出胞内表达的蛋白物质,后续进行蛋白纯化处理。
实验用仪器:
高压均质机 GSL-5
进行此实验前先了解一下注意事项:
当样品折光率发生明显变化时,便说明已经完成了细胞破碎,请勿继续破碎。不然可能造成蛋白质结构的分解。使用超声波破碎和高压均质机的破碎,由于原理和均质效果的不同,在进行液相检测时两项技术做出的蛋白峰是会有不同的。客户在做实验时一定要让跟随着老师一起做实验,不然后续结果不理想无法分析出原因。
实验步骤:
1、连接管路,打开主机及冷水机。
2、排除液封液体、加入纯水清洗管道
3、加入样品,等出料口出液后,进行步进式加压至500bar 均质2次。
4、完成样品均质,出料口接料。
5、加入纯水清洗,并泄压,直至纯水清澈。
6、加入无水乙醇,等待出料口出样,停止主机。
实验效果:
细胞处理前后对比图