胰蛋白酶由于其能够特异性酶解精氨酸和赖氨酸羧基端，是基于质谱技术的蛋白质组学领域应用最为广泛的蛋白酶。胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素，在胰岛素的生产中发挥着重要作用，以猪源胰蛋白酶基因为模板，克隆扩增胰蛋白酶原(TgM)基因，将其转化大肠杆菌，构建含TgM基因的工程菌株并诱导表达，菌液经高压均质机破碎，收集破碎后菌液，经提纯后得到胰蛋白酶原液，用于后续酶活测定等试验。本研究中，菌体破碎使用的是高压均质机，可将工程菌株破碎率提升，最后得到较高浓度的蛋白溶液。
实验设备
高压均质机 GSL-5
实验步骤：
1.准备高压均质机GSL-5（定制17ml处理量带在线排气）1台、标配款冷水机1台。
2.收集大肠杆菌样品进行仪器上机前处理。
3.清洗仪器，倒入处理后的大肠杆菌样品；压力调大800-1000bar处理3-4遍。
4.压力归零，收集均质后的样品。实验结果
均质前均质后用紫外分光光度法检测酶活力，并将最终纯化获得的突变胰蛋白酶用于后续与胰岛素原相关实验。
实验效果：
注意事项：
1、注意GSL-5带在线排气最小处理量，控制好样本进样量。
2、大肠杆菌在均质时排空会有较多气泡属于正常情况。
高压均质机是一款利用高压泵将物料加压至一定压力后，通过均质阀的狭窄缝隙，使物料在高压下受到剪切、冲击和空穴效应等作用，从而达到均质、乳化和破碎等目的的设备，具有压力高、体积小、操作便捷、处理效率高等特点，广泛应用于制药、生物工程、食品、精细化工等领域。
参考文献：
[1]杨敏,黄潇,张一唯,等.重组猪胰蛋白酶突变体基因在大肠杆菌中的克隆、表达与活性分析[J].药物生物技术,2015,22(04):283-287.DOI:10.19526/j.cnki.1005-8915.2015.04.001.
[2]李锐东,汪敏,王璐璐,等.胰蛋白酶与赖氨酸C端内切酶不同顺序酶切对蛋白质组样本制备的影响[J/OL].中国生物化学与分子生物学报,1-12[2024-11-05].https://doi.org/10.13865/j.cnki.cjbmb.2024.09.1220.
[3]胡子俊,卢宏亮,赵晨雨,等.鳜胰蛋白酶基因进化及启动子功能分析[J].中国水产科学,2024,31(05):524-536.
