胰蛋白酶由于其能够特异性酶解精氨酸和赖氨酸羧基端,是基于质谱技术的蛋白质组学领域应用最为广泛的蛋白酶。胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素,在胰岛素的生产中发挥着重要作用,以猪源胰蛋白酶基因为模板,克隆扩增胰蛋白酶原(TgM)基因,将其转化大肠杆菌,构建含TgM基因的工程菌株并诱导表达,菌液经高压均质机破碎,收集破碎后菌液,经提纯后得到胰蛋白酶原液,用于后续酶活测定等试验。本研究中,菌体破碎使用的是高压均质机,可将工程菌株破碎率提升,最后得到较高浓度的蛋白溶液。
实验设备
高压均质机 GSL-5
实验步骤:
1.准备高压均质机GSL-5(定制17ml处理量带在线排气)1台、标配款冷水机1台。
2.收集大肠杆菌样品进行仪器上机前处理。
3.清洗仪器,倒入处理后的大肠杆菌样品;压力调大800-1000bar处理3-4遍。
4.压力归零,收集均质后的样品。实验结果
均质前均质后用紫外分光光度法检测酶活力,并将最终纯化获得的突变胰蛋白酶用于后续与胰岛素原相关实验。
实验效果:
注意事项:
1、注意GSL-5带在线排气最小处理量,控制好样本进样量。
2、大肠杆菌在均质时排空会有较多气泡属于正常情况。
高压均质机是一款利用高压泵将物料加压至一定压力后,通过均质阀的狭窄缝隙,使物料在高压下受到剪切、冲击和空穴效应等作用,从而达到均质、乳化和破碎等目的的设备,具有压力高、体积小、操作便捷、处理效率高等特点,广泛应用于制药、生物工程、食品、精细化工等领域。
参考文献:
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